ESPECIFICIDAD O SELECTIVIDAD

La especificidad, es la capacidad de un método analítico para obtener una respuesta debida únicamente al analito de interés y no a otros componentes de la muestra.

La metodología del ensayo varía según el tipo de método, de la siguiente manera:

1. Pruebas de Identificación. Garantizan la identidad del analito. En análisis cualitativo debe demostrarse la capacidad de distinguir compuestos de estructura estrechamente relacionada cuya presencia resulta probable. Esta capacidad debería confirmarse mediante la obtención de resultados positivos a partir de muestras que contengan el analito, junto con resultados negativos de muestras que no contengan dicho analito, y mediante la confirmación que no se obtiene una respuesta positiva de materiales con estructura similar o estrechamente relacionada a la del analito.
2. Pruebas de Pureza. Garantizan que todos los procedimientos analíticos efectuados permiten declarar con exactitud el contenido de impurezas de un analito (por ejemplo, prueba de sustancias relacionadas, límites de metales pesados, impurezas orgánicas volátiles). La selectividad puede establecerse mediante la adición al fármaco o producto farmacéutico de una cantidad de impurezas en concentraciones adecuadas, y la demostración que esas impurezas se determinan con exactitud y precisión adecuadas.
3. Valoraciones. Proporciona un resultado exacto, que permita una declaración exacta del contenido o potencia del analito en una muestra. Los métodos empleados en la valoración de un ingrediente activo farmacéutico, se pueden dividir así:

• Para método de control de calidad. Se analizan según la metodología a validar, un placebo del producto, un estándar de referencia y un placebo más analito. Si es posible se analizan placebos del producto cargados con sustancias relacionadas, precursores y/o homólogos y una mezcla de placebo, analito y dichos productos. Es importante demostrar con evidencia que los resultados analíticos obtenidos no resultan afectados por la presencia de estos materiales extraños.
• Para método indicadores de estabilidad. Se prepara un placebo reciente, conteniendo todos los ingredientes de una muestra normal, excepto el analito, un placebo cargado, un estándar de referencia, y si es posible un placebo cargado con los productos de degradación. Si se sospecha que en la fórmula hay productos que puedan interferir con el análisis, se corren estos compuestos individualmente y se determina si es necesario modificar el método de análisis o el de preparación.
  

Todas estas muestras se analizan por la metodología a validar. Si el método es por HPLC, se inyecta fase móvil, si se cuenta con arreglo de diodos, se chequea la pureza de los picos de interés en la muestra del placebo cargado, la cual debe ser mínimo 0,99 % para considerar que el método es especifico. En todos los demás casos no debe existir respuesta significativa de los excipientes o blancos, en la cuantificación de los activos.

Se analizan según la metodología a validar, placebo, estándar, placebo más analito y placebo más los productos de degradación del analito.

Si no se dispone de estándares de impurezas o de los productos de degradación, puede demostrarse la especificidad comparando los resultados de las pruebas de muestras que contengan impurezas o productos de degradación con los de un segundo procedimiento bien caracterizado (por ejemplo, un procedimiento farmacopéico u otro procedimiento validado). Estas comparaciones deberían incluir muestras sometidas a condiciones forzadas relevantes (por ejemplo, luz, calor, humedad, hidrólisis acida y alcalina, oxidación). En una valoración, deben compararse los resultados; en pruebas de impureza cromatográfica, deben compararse los perfiles de impurezas.

NOTA: Estas soluciones (sometidas a condiciones forzadas) deben ser neutralizadas previas al análisis,para evitar, en el caso de métodos como el HPLC, daños en la columna u otras partes del instrumento. Todos estos estudios no se deben llevar a cabo para analitos o componentes del placebo que según la bibliografía tengan propiedades reactivas que puedan dar lugar a condiciones inseguras al someter las muestras a las condiciones antes mencionadas.

Opcionalmente se pueden incluir muestras de estudios de estabilidad acelerado o muestras de estabilidad natural (de 2 a 3 años o más) y comparar con los resultados iníciales.En el caso de los métodos no selectivos, como por ejemplo los métodos volumétricos la especificidad para los componentes de una muestra, es sustentada con los resultados de exactitud y linealidad del método, si este ha cumplido con dichos criterios de aceptación.

Criterios de aceptación

Los documentos de ICH afirman que cuando se utilizan los procedimientos cromatográficos, deberán presentarse cromatogramas representativos para demostrar el grado de selectividad (se debe manejar una escala reducida, que permita observar bien las impurezas o productos de degradación) y los picos deberán identificarse adecuadamente, aquellas impurezas desconocidas deberán ser identificadas con el tiempo de retención relativo, tomando como referencia el activo, la resolución o la relación altura/valle, cromatográfica entre los picos próximos al pico de interés debe ser mayor de 1.0.
Las pruebas de pureza de picos (por ejemplo, utilizando redes de diodos o espectrometría de masa) pueden resultar útiles para demostrar que el pico cromatográfico del analito no puede atribuirse a más de un solo componente. Se acepta que el pico de interés tiene una pureza de pico correcta, cuando el valor del umbral es mayor de 990.

El placebo está constituido por todos los excipientes y recubrimientos (tintas, dispositivos de sumersión y cubiertas de cápsulas se incluyen cuando corresponda) sin el ingrediente activo. La interferencia del placebo puede determinarse pesando las muestras de la mezcla del placebo y disolviéndolas o pesándolas en el medio de disolución a las concentraciones que se puedan encontrar durante la prueba. Es preferible realizar este experimento a 37°C comparándolo al 100% del estándar, por la formula:

100C(Ap/As)(V/L)

En donde C es la concentración, en mg por mL, del estándar: Ap y As son las absorbancias del placebo y del estándar respectivamente; V es el volumen, en mL, del medio; y L es el valor declarado, en mg. La interferencia no debe exceder de 2%.
Para productos de liberación prolongada, puede ser más apropiado usar una versión del placebo de la forma farmacéutica terminada que las mezclas, ya que la formulación del placebo liberará varios excipientes de cierta manera que reflejará el producto mejor que una simple mezcla de excipientes. En este caso, puede ser necesario evaluar la interferencia potencial en puntos múltiples de muestreo en el perfil de liberación.

Si la interferencia del placebo excede el 2%, entonces puede requerirse, para evitar la interferencia, una modificación del método-tales como:

1. Elegir una longitud de onda.
2. Sustraer la línea base empleando una longitud de onda mayor o
3. Utilizar HPLC. Cuando están presentes otros fármacos activos o hay significativos niveles de degradación, es necesario demostrar que estos no afectan demasiado los resultados. Un procedimiento para lograrlo es medir la matriz en presencia y ausencia del otro fármaco activo o producto de degradación; toda interferencia no debe exceder el 2.0%.