LÍMITE DE DETECCIÓN Y CUANTIFICACIÓN

Son varios los métodos empleados para la determinar el límite de detección (LOD) y límite de cuantificación (LOQ), dependiendo si el procedimiento es instrumental o no instrumental.
Siempre que un método analítico se emplee en la determinación de impurezas o trazas de un principio activo es recomendable de entrada establecer LOD y LOQ.

Metodología

Basado en la evaluación visual.

Esta puede ser usada en los dos diferentes tipo de métodos instrumentales y no instrumentales. Se determina a partir de análisis de muestras de concentraciones conocidas y decrecientes del analito. Estableciéndose visualmente la mínima cantidad de analito detectada y cuantificada. Este se emplea mucho en método de cromatografía de capa fina o TLC.

Basado en la Señal-Ruido.

Este procedimiento aplica a métodos que utilizan instrumentos para medir la respuesta analítica y presentar una señal de ruido basal.

Un analista debe preparar 3 soluciones blanco (reactvos, placebos analíticos, etc. según proceda) y determinar su respuesta por duplicado; si el método es espectrofotométrico o se utiliza algún tipo de blanco, las lecturas se hacen contra estos blancos establecidos en el método.
Conjuntamente debe preparar muestras (de placebo más analitos) en un intervalo que comprenda el límite de detección o cuantificación requerido; dicho intervalo debe poseer 5 niveles de calibración, dos por debajo y dos por encima del LOD o LOQ establecido.
Determinar aquella cantidad del analito que genere una respuesta con respecto a la muestra blanco en una proporción de 3 a 1 para el límite de detección y de 10 a 1 para el límite de cuantificación.

Basado en la desviación estándar de la respuesta y la pendiente.

El límite de detección puede ser expresado como:El límite de cuantificación puede ser expresado como:Donde.
σ = desviación estándar de la respuesta
S = La pendiente de la curva de calibración
La pendiente S puede ser estimada a partir de la curva de calibración de soluciones diluidas del analito.
La estimación de σ puede determinarse de varias formas:

Basado en la desviación estándar de un blanco. Mide la magnitud de la respuesta de fondo analítica realizado por el análisis de un número apropiado de blanco de muestras (placebo) y calculando la desviación estándar de estas respuestas.

Basada en la curva de calibración. Una curva de calibración específica debe ser estudiada usando muestras que contengan el analito en el rango del LOD y LOQ, la desviación estándar residual de la línea de regresión o la desviación estándar de y-intercepto de la línea de regresión puede ser usada como desviación estándar.

Basado en el método experimental de Eurachem.

Este se aplica cuando no existe la posibilidad de tener una muestra placebo o cuando ya tenemos un valor fijado para LOQ, consiste en preparar una serie de muestras con cantidades decrecientes de analito y analizar cada una de ellas 6 veces consecutivas, representando CV(%) de la precisión frente a la concentración de cada muestra.

Normalmente se fija un criterio de precisión de un CV=10% en el límite de cuantificación.

Basada en los márgenes establecidos en la tabla de la AOAC 1993.

Independientemente del enfoque utilizado, el límite de cuantificación debería validarse posteriormente mediante el análisis de un número adecuado de muestras que se sepa que están cerca del LOD o LOQ o fueron preparadas a este límite.

Criterios de aceptación

• El límite de detección debe ser menor a la especificación de la prueba de impurezas límite.


• El límite de cuantificación debe ser menor a la especificación del contenido / valoración de la prueba de impurezas.